Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐构建

从第一次显现人体内自身病原体到显现1型式心血管疾病流行病学呕吐的实质性率在老年人时期就有很好的描述，多个人体内自身病原体HIV的老年人以后有70%在血清转换后10年内患心血管疾病，而随访15年的老年人这一比重提高到84%。比起之下，分之一流行病学1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的肺癌机制还没有人给予必要的研究课题。

越来越多的人开始常用分期系统来假定1型式心血管疾病的实质性：生殖在显现多种人体内自身病原体时进入第1先决条件，显现摄入量异常时进入第2先决条件，显现呕吐时进入第3先决条件。一些多发人体内自身病原体HIV的生殖，在1期和2期，实质性较慢，并发展为肺癌的1型式心血管疾病。我们以后描述了一一组在首次验证到多种人体内自身病原体样品后至少10年无心血管疾病的极慢实质性者，这一组呕吐人数少，但形态非常明确。随后，我们发现人体内自身上皮细胞上皮细胞CD8+T细胞核化学反应在实质性相比较慢的呕吐以后基本上不存在，但在近来肺癌和曾一度存在的心血管疾病呕吐以后很易于验证到。这或许表明，与实质性呕吐比起，这些呕吐自身免疫化学反应的调节增强。

早期研究课题表明，尽管调节性T细胞核(Treg)生产量正常，但心血管疾病呕吐存在一些功用缺陷，其以后包括对IL-2的化学反应能力降低。此外，心血管疾病呕吐以后的不稳定性CD4+T细胞核或许对调节更具抵抗性，发挥为不稳定性T细胞核的减缓弱化，自然产生的Treg和人体内产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞核以后IL-2化学反应弱化。本研究课题的旨在是描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群极相比较慢实质性者以后的形态，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以一些人相结合的侧向研究课题，在21岁以下确诊的呕吐子女以后检查和1型式心血管疾病的危险因素所。我们以后描述了曾一度相比较慢实质性者的形态，他们保持多重人体内自身病原体HIV将近10年，但没有人显现心血管疾病的流行病学呕吐，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名在此之后保持无心血管疾病并愿意提供大量血液样品的相比较慢实质性者纳入T和B细胞核功用数据分析。在目前的研究课题以后，8名慢实质性者(SP一组)，以后位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身病原体HIV。所有的参与者都西北面1型式心血管疾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身病原体对某些上皮细胞的HIV化学反应，然而，一名呕吐已经西北面2期至少6年，但没有人显现流行病学呕吐，一名呕吐被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在研究课题小一组以后对该NADP透过了单独评估。分离出来外周血单个核子细胞核(PBMCs)，转用多数值流式细胞核绝技和T细胞核减缓试验评估NADP以后Treg的频率、表型式和功用。常用FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和重回)透过无监理聚类数据分析，评估Treg表型式。

结果：与有益NADP比起，来自慢实质性体的思绪CD4+T细胞核的监理聚类推断，应答的思绪CD4+ Treg频率提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关复合物(GITR)阐释提高有关。一名HbA1c升高的呕吐与实质性相比较慢者和匹配的对应一组比起，Treg谱有所不同。功用得出结论，与有益NADP比起，来自相比较慢实质性体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞核减缓显着毁损。发挥为对不稳定性CD4+T细胞核CD25和CD134阐释的减缓提高。

所示1 深入的表型式数据分析推断，CD4+Treg亚型式在慢实质性队列以后提高。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上面物阐释检验出10个元簇:思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个不同Treg上面转换成的10个元簇的MST。每个节点代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在节点一组周围上色。每个节点以后的饼所示坚称单个上面的阐释行政级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断基本上面阐释。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转换成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相相比较丰度为每个metacluster装两条路线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核(l)。红色带子代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的预测模型式证实，Treg频率的提高是实质性相比较慢的标志。分级依赖型(a - f)和橄榄数据分析(g-k)相比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的标志性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR阐释透过分离出来，实时FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)一组以及NADPSP 606(红色)以后CD25+ cd127的频率概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的装两条路线所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释强度制做，箭头明显的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)装两条路线所示推断了在SP(斑点)和HD(灰点)一组以后，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相相比较丰度(比重)。(k)直方所示推断每个簇的表型式(深蓝色)和Treg上面相相比较阐释与时代背景阐释(蓝色);上列，存储器Treg_3;上面偷偷地，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇以后上面的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与有益献血者比起，实质性相比较慢者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T细胞核元簇(思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个阐释上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的阐释热所示(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇以后所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR阐释串联，推断直方所示(c)和概要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不包括在测试以后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs以后GITR阐释，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，推断直方所示(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自相比较慢实质性的CD4+ treg细胞核控制不稳定性CD4+T细胞核的能力降低。SP一组用蓝色的两条路线和带子坚称，HD一组用黑色的两条路线和带子坚称，红色的两条路线/带子坚称NADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(应答者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培植3天后透过流式细胞核绝技验证。(a-d)与CD4+应答者相相比较应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。常用HIV对应(应答的响应细胞核不含treg)测算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞核对相比较慢实质性的T细胞核酪氨酸的减缓更敏感。SP一组用蓝色的两条路线和带子坚称，HD一组用黑色的两条路线和带子坚称，红色的两条路线/带子坚称NADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上面，treg按掩蔽的比重滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞核，培植3天后透过流式细胞核绝技(CD25反染)和细胞核因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者联合培植。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植以后的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们得出的结论是，来自相比较慢实质性子的酪氨酸思绪CD4+Treg在GITR阐释以后给予了扩展和丰富，阐释了进一步研究课题Treg在1型式心血管疾病后果生殖以后的表型的有效性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28